Ученые МГУ провели исследование, сравнив эффективность двух версий технологии CRISPR-Sirius для визуализации локусов хроматина в живых клетках. Работа показала, что использование белка MCP с флуоресцентным маркером MS2 обеспечивает более точное отображение структуры хроматина.
CRISPR-Sirius — это система визуализации, состоящая из трех ключевых компонентов: каталитически неактивного фермента dCas9, гидовой РНК и флуоресцентного белка. Система позволяет отслеживать динамику хроматина, включая движение отдельных генов или регуляторных элементов генома. Это открывает новые возможности для изучения экспрессии генов, репликации и репарации ДНК.
«Оптимизация параметров этой технологии заняла без малого два года... В нашей работе мы описали подводные камни её применения и предложили наиболее эффективный вариант для визуализации хроматина»,
- Владимир Вьюшков, научный сотрудник МГУ.
Исследователи также сравнили два способа доставки генов гидовых РНК в клетки: лентивирусную трансдукцию и транзиентную трансфекцию. Лентивирусный метод показал более стабильные результаты, позволяя достигнуть высокой эффективности экспрессии всех компонентов системы.
Особое внимание ученые уделили визуализации границ топологически ассоциированных доменов (ТАДов) — структур, обеспечивающих компактизацию хроматина. Эти данные помогут лучше понять механизмы организации и динамики генома, а также закономерности формирования ТАДов.
Исследование стало важным шагом в совершенствовании методов синтетической биологии и визуализации, предлагая технические решения для оптимального использования CRISPR-Sirius в лабораторной практике.
Источник: пресс-служба МГУ
